కణ సంస్కృతుల క్రియోప్రెజర్వేషన్ కోసం ప్రాథమిక చిట్కాలు

కణ సంస్కృతుల క్రియోప్రెజర్వేషన్ కోసం ప్రాథమిక చిట్కాలు

సాధారణ వృద్ధి కార్యకలాపాల సమయంలో కణాలు వాటి జీవక్రియను కొనసాగిస్తాయి, దీనికి వివిధ ప్రోటీసెస్ పాల్గొనడం అవసరం. ఉష్ణోగ్రత -70 below C కంటే తక్కువగా పడిపోయినప్పుడు, ప్రోటీసెస్ పనిచేయడం ఆగిపోతుంది. అందువల్ల, చాలా తక్కువ ఉష్ణోగ్రత ఉన్న వాతావరణంలో, కణాలు వాటి జీవక్రియ కార్యకలాపాలను ఆపి, దీర్ఘకాలిక నిల్వను అనుమతించే నిద్రాణమైన స్థితిలో ప్రవేశించగలవు.

1. ప్రయోగాత్మక పదార్థాలు

బేస్ మెటీరియల్:

ప్రాథమిక సంస్కృతి మాధ్యమం

సీరం

అల్ట్రాపుర్ వర్క్‌బెంచ్

శుభ్రమైన డైమెథైల్ సల్ఫాక్సైడ్ (DMSO)

శుభ్రమైన పిబిఎస్ ఫాస్ఫేట్ బఫర్ ఉప్పు ద్రావణం

పైపెటింగ్ గన్

ఎలక్ట్రిక్ పైపెటింగ్ గన్

ప్రయోగాల తయారీ

ఎ) గడ్డకట్టే పరిష్కారం తయారీ:

సాధారణ కణాలు: 55% బేసల్ మీడియం + 40% బోవిన్ సీరం (FBS/NBS) + 5% DMSO

ముఖ్యమైన కణాలు: 90% బోవిన్ సీరం (FBS/NBS) + 10% DMSO

తయారుచేసిన క్రియోప్రెజర్వేషన్ ద్రావణాన్ని 15 ఎంఎల్ సెంట్రిఫ్యూజ్ ట్యూబ్ [గూడు] లోకి ఆల్కాట్ చేయండి మరియు తరువాత ఉపయోగం కోసం 4 ° C వద్ద నిల్వ చేయండి.

(బి) స్తంభింపచేయడానికి కణాల తయారీ:

కణాలను గడ్డకట్టే ముందు, మంచి వృద్ధి స్థితి మరియు లోగరిథమిక్ వృద్ధి దశలో కణాలను ఎంచుకోండి మరియు సెల్ పరిస్థితిని నిర్వహించడానికి గడ్డకట్టే ముందు 12-24 గంటల ముందు వాటిని తాజా మాధ్యమంతో భర్తీ చేయండి.

2. ప్రయోగాత్మక విధానం

1. కణాల సాంద్రతను స్తంభింపచేయడానికి గమనించండి, ఇది 80%~ 90%. పాత మాధ్యమాన్ని ఆకాంక్షించడానికి పైపెట్ గన్ ఉపయోగించండి, కణాలను 1-2 సార్లు కడగడానికి శుభ్రమైన పిబిఎస్ వేసి, సంస్కృతి వాతావరణంలో మిగిలిన మాధ్యమాన్ని తొలగించండి.

2. ట్రిప్సిన్ కణాలలోకి ప్రవేశించడానికి అనుమతించడానికి తగిన మొత్తంలో ట్రిప్సిన్ లేదా జీర్ణ రసం జోడించండి మరియు జీర్ణక్రియ కోసం వాటిని ఇంక్యుబేటర్‌లో ఉంచండి. సూక్ష్మదర్శిని క్రింద కణాల పరిస్థితిని గమనించండి: సైటోప్లాజమ్ ఉపసంహరించుకుంటుంది మరియు కణాలు ఇకపై షీట్లలోకి అనుసంధానించబడవు. ఈ సమయంలో, జీర్ణక్రియ ప్రక్రియను ఆపడానికి స్టాప్ ద్రావణాన్ని జోడించండి.

3. సెల్ సస్పెన్షన్ ఏర్పడటానికి చిట్కాతో కణాలను శాంతముగా బబుల్ చేయండి మరియు సెల్ సస్పెన్షన్‌ను 1000 ఆర్‌పిఎమ్ వద్ద 3-5 నిమిషాలు సెంట్రిఫ్యూజ్ చేయండి.

సూపర్నాటెంట్‌ను విస్మరించండి, గడ్డకట్టే ద్రావణాన్ని తగిన మొత్తంలో జోడించండి మరియు కణాలు ఒకే విధంగా లెక్కించడానికి పైపెట్‌ను శాంతముగా పైపెట్ చేయండి. తుది సాంద్రత 5 × 106/ml ~ 1 × 107/ml చేయడానికి క్రియోప్రెజర్వేషన్ మాధ్యమంతో సెల్ సాంద్రతను సర్దుబాటు చేయండి.

4. ఆశించిన సామర్థ్యం ప్రకారం క్రయోజెనిక్ గొట్టాలను వేరు చేయడానికి పైపెట్ గన్ ఉపయోగించండి మరియు క్యాప్ మరియు సీల్ చేయడానికి ఆటోమేటిక్ క్యాపింగ్ మెషీన్ను ఉపయోగించండి.

5. ప్రామాణిక క్రియోప్రెజర్వేషన్ ప్రోగ్రామ్ -1 ° C నుండి -2 ° C/min యొక్క శీతలీకరణ రేటు, మరియు స్తంభింపచేయవలసిన కణాలు ఈ క్రింది దశల ప్రకారం క్రమంగా స్తంభింపజేయవచ్చు: గది ఉష్ణోగ్రత → 4 ° C (20min) → - 20 ° C (30min) → -80 ° C ° C (రాత్రిపూట) ద్రవ నత్రజనిలో దీర్ఘకాలిక నిల్వ.

ఇది నేరుగా రాత్రిపూట -80 ° C వద్ద ఫ్రీజర్‌లో నిల్వ చేయబడుతుంది మరియు తరువాత నిల్వ కోసం ద్రవ నత్రజనికి బదిలీ చేయబడుతుంది.

యోంగ్యూ మెడికల్ అనేది ఆర్ అండ్ డి, బయోమెడికల్ వినియోగ వస్తువుల ఉత్పత్తి మరియు అమ్మకాలలో ప్రత్యేకత కలిగిన హైటెక్ ఎంటర్ప్రైజ్. పైపెట్ చిట్కాలు, పైపెట్స్, పిసిఆర్ ప్లేట్, సెల్ కల్చర్ ప్రొడక్ట్స్ మరియు ఇతర జీవ ప్రయోగశాల వినియోగ వస్తువులు. యోంగ్యూ మెడికల్ మీ నమ్మకం మరియు ఎంపికకు అర్హమైనది! సంప్రదించడానికి స్వాగతం!